分光光度法测铁：校准曲线与未知样
用移液管和容量瓶配制一系列铁标准溶液，显色后在 510 nm 测吸光度，用最小二乘拟合校准线，再测未知样和试剂空白，报告铁的浓度、置信区间和检出限。
实验目的 用外标校准法测定未知水样中铁的浓度，并给出 95 % 置信区间、检出限和定量限。
操作步骤
- 选择移液体积：用 A 级移液管把 10.00 mg/L 铁标准液移入 50 mL 容量瓶，得到 0–5 mg/L 的一组标准（至少 5 个点，包括空白）。
- 每个容量瓶中加入盐酸羟胺（把 Fe³⁺ 还原为 Fe²⁺）、邻二氮菲和醋酸钠缓冲液，定容、摇匀，放置 10 分钟显色。
- 在 510 nm、1.00 cm 比色皿中测量全部标准的吸光度，拟合校准线并检查残差图。
- 测量至少 5 个试剂空白，求空白的标准偏差和检出限。
- 把未知样按同样方法显色，测 3–5 次，由校准线求浓度及其 95 % 置信区间；最后揭晓真值核对。
注意观察
- 标准溶液的颜色从几乎无色到橙红色逐渐加深——吸光度与浓度成正比（比尔定律）。
- 即使移液管都在 A 级允差之内，标准点也不会严格落在一条直线上；残差应当随机分布。
- 未知样的置信区间在校准范围中部最窄；多读几次未知样，区间会变窄，但到一定程度后受限于校准线本身。
- 只用 2–3 个标准时，t 值很大（ν = n − 2），区间会宽得惊人。
真实实验室
- 邻二氮菲有毒，盐酸羟胺有刺激性：戴手套和护目镜，废液按重金属与有机废液分类收集。
- 比色皿要用待测溶液润洗，擦干透光面上的指纹和液滴；每次测量前用试剂空白调零。
- 显色需要时间且与 pH 有关（pH 3–9 之间颜色稳定）；所有溶液应在相同条件下显色、在相近时间内测定。
- 样品若有基体干扰（其他有色离子、强络合剂），应做加标回收实验或改用标准加入法。