凯氏定氮测蛋白质
消化、蒸馏、滴定:测出牛奶、面粉、花生和明胶的含氮量,再用 6.25 和琼斯的专用系数换算成蛋白质,看看“蛋白质含量”有多依赖换算系数。
实验目的 用凯氏法测定食品的含氮量,正确扣除空白,并比较不同换算系数给出的蛋白质含量。
操作步骤
- 选全脂牛奶(5.000 g),先消化,再把 NH₃ 蒸入硼酸。
- 用 0.1000 mol/L HCl 滴定接收瓶:先每次 1 mL,接近终点时逐滴加入,指示剂由绿变灰紫时记下读数。
- 依次测面粉、花生和明胶,记下 %N 和两种换算系数给出的蛋白质。
注意观察
- 牛奶在约 18.95 mL 到达终点:含氮 0.528 %,蛋白质 3.30 %(× 6.25)或 3.37 %(× 6.38)。
- 接收瓶起始 pH 约 8.0(硼酸缓冲),终点约 4.9,过量两滴后迅速降到 4.4 以下。
- 明胶按 6.25 算出约 91 % 蛋白质,按 5.55 只有约 81 %;花生从 25.8 % 降到 22.5 %,牛奶反而略升。
真实实验室
- 消化必须在通风橱中进行,浓硫酸沸腾时放出 SO₂ 和 SO₃ 白烟;溶液变清后还要继续加热一段时间,才能保证氮全部转化。
- 加 NaOH 前要把消化液冷却并稀释,否则会剧烈沸腾;蒸馏管末端要插入硼酸液面以下,以免氨逸失。
- 每批样品都要做空白,并用已知含氮量的标准物(如硫酸铵或乙酰苯胺)检查回收率。